技术领域
本发明涉及生物医药技术，就涉及YG1702在制备抗尤文氏肉瘤的药物中的应用。
背景技术
尤文肉瘤是一种恶性骨肿瘤，好发于儿童和青少年，男性略占优势。其标准治疗方案为高强度化疗结合手术/放疗。目前，接受细胞毒性治疗方案后，标准风险的局部病变尤文肉瘤患者5年生存率可达到70-80％，但原发播散性尤文肉瘤患者5年总生存率仍徘徊在13-30％。更遗憾的是，约30-40％局部原发性和60-80％原发性播散性尤文肉瘤患者会复发，而初次诊断后24月内复发者的5年生存率不足10％。
EWS-FLI1作为尤文肉瘤致癌因子驱动大量表观遗传重塑及异常转录，但本身为无序蛋白难以靶向。因此，深入探究尤文肉瘤表观遗传及转录调控机制，寻找新的治疗靶点和靶标，具有重要的临床意义。近年来，肿瘤代谢-表观遗传轴因在多种恶性肿瘤的靶向治疗中提供新的策略而备受关注。脯氨酸代谢因参与大量脯氨酰羟基化介导的表观遗传修饰在肿瘤代谢-表观遗传轴中发挥重要作用。ALDH18A1作为脯氨酸代谢的关键酶，其催化产物P5C与脯氨酸形成P5C-脯氨酸循环发挥重要“副代谢”作用。ALDH18A1的高表达与尤文肉瘤自我更新能力密切相关。
因此，探究ALDH18A1的小分子抑制剂YG1702是否能用于治疗尤文肉瘤具有重要的意义。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种YG1702在制备抗尤文氏肉瘤的药物中的应用。
为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：
1、YG1702在制备抗尤文氏肉瘤的药物中的应用。
本发明优选的，YG1702在制备抑制尤文氏肉瘤ALDH18A1基因表达的药物中的应用。
本发明优选的，YG1702在制备抑制尤文氏肉瘤细胞的细胞增殖的药物中的应用。
本发明优选的，YG1702在制备抑制尤文肉瘤细胞的平板克隆形成能力的药物中的应用。
本发明优选的，YG1702在制备抑制尤文肉瘤细胞的成球能力的药物中的应用。
本发明优选的，YG1702在制备抑制尤文肉瘤EWS-FLI1融合基因及其下游靶基因表达的药物中的应用。
本发明优选的，所述下游靶基因为EZH2、ID2、PTPL1、CCND1、VEGFA。
本发明优选的，YG1702在制备抑制尤文肉瘤细胞成瘤能力的药物中的应用。
本发明的有益效果在于：本发明公开了YG1702在制备抗尤文氏肉瘤的药物中的应用，YG1702通过抑制尤文氏肉瘤ALDH18A1基因表达，从而能够有效抑制尤文肉瘤增殖、自我更新和体内成瘤能力，抑制尤文肉瘤EWS-FLI1融合基因及其下游靶基因EZH2、ID2、PTPL1、CCND1、VEGFA表达，可能成为潜在的靶向治疗候选小分子，本发明对于寻找新的尤文肉瘤治疗靶标，改善尤文肉瘤患者联合治疗效果，具有潜在的临床价值。
附图说明
为了使本发明的目的、技术方案和有益效果更加清楚，本发明提供如下附图进行说明：
图1为尤文肉瘤细胞中YG1702的体外药物敏感性(图1,A)和使用YG1702对尤文肉瘤细胞的增殖能力的影响(图1,B)；
图2为YG1702对尤文肉瘤细胞的平板克隆形成能力的影响(图2,A-B)；
图3为YG1702对尤文肉瘤细胞的成球能力的影响(图3,A-B)；
图4为YG1702对尤文肉瘤细胞中EWS-FLI1下游靶基因表达变化的影响(图4,A-B)；
图5为不同剂量的YG1702对尤文肉瘤组织(心、肝、肾、肺以及脾)的毒性作用；
图6为YG1702对尤文肉瘤体内成瘤能力的影响(图6,A-C)。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本发明作进一步说明，以使本领域的技术人员可以更好的理解本发明并能予以实施，但所举实施例不作为对本发明的限定。
本发明中YG1702的结构同申请号为201810529687.6的发明专利中的YG1702。
实施例1、YG1702抑制尤文肉瘤细胞的细胞增殖能力
利用CCK8细胞活性实验检测在A673和SK-N-MC中YG1702的IC50值，分别为0.10μM±0.01μM和0.06μM±0.03μM(图1,A)。进一步在IC50的药物浓度处理下，绘制生长曲线。结果显示，与对照组相比，YG1702浓度在IC50时，尤文肉瘤细胞的吸光度值显著下降(图1,B)。上述结果表明，ALDH18A1抑制剂YG1702能显著降低尤文肉瘤细胞体外增殖能力。
实施例2、YG1702降低尤文肉瘤细胞的平板克隆形成能力
通过平板克隆形成实验，评估ALDH18A1抑制剂YG1702是否能抑制尤文肉瘤细胞的克隆形成能力。结果发现，YG1702处理A673和SK-N-MC细胞后，与对照组相比，尤文肉瘤细胞的克隆形成数量显著降低(图2,A-B)。上述结果表明，ALDH18A1抑制剂YG1702能够显著抑制尤文肉瘤细胞的平板克隆形成能力。
实施例3、YG1702降低尤文肉瘤细胞的成球能力
成球实验发现，YG1702处理A673和SK-N-MC细胞后，与对照组相比，尤文肉瘤细胞所形成细胞球的数量显著减少(图3,A-B)。上述结果进一步表明，ALDH18A1抑制剂YG1702能够显著降低尤文肉瘤细胞的自我更新能力。
实施例4、YG1702下调PARP1等EWS-FLI1下游靶基因的表达
ALDH18A1抑制剂YG1702抑制尤文肉瘤细胞体外增殖能力、平板克隆形成能力以及成球能力。接下来，进一步探讨YG1702对尤文肉瘤细胞PARP1等EWS-FLI1下游靶基因的影响。结果表明，YG1702处理A673细胞后，不仅抑制了PARP1的mRNA表达，还广泛下调了包括EZH2、ID2、PTPL1、CCND1、VEGFA等在内的多个EWS-FLI1下游靶基因的mRNA水平(图4,A)(表1)。同样，YG1702处理SK-N-MC细胞后，除了抑制PARP1的mRNA表达之外，亦广泛下调了包括EZH2、ID2、PTPL1、CCND1、VEGFA、UPP1等在内的EWS-FLI1下游靶基因的mRNA水平(图4,B)(表1)。上述结果表明，ALDH18A1抑制剂YG1702能够下调PARP1等EWS-FLI1下游靶基因的表达。
表1、EWS-FLI1及其下游靶基因的引物序列信息
实施例5、YG1702下调PARP1等EWS-FLI1下游靶基因的表达
最后，验证ALDH18A1抑制剂YG1702对尤文肉瘤细胞体内成瘤能力的影响。首先，检测不同剂量YG1702对小鼠脏器的影响。组织HE染色结果表明，在6.25mg/kg、12.50mg/kg、25mg/kg、50mg/kg四种给药浓度下，未见明显脏器的损伤(图5)。进一步，以A673细胞系构建裸鼠皮下移植瘤模型，评价YG1702对尤文肉瘤的治疗学意义。以多柔比星(Doxorubicin，Dox)为阳性对照药，将小鼠分为四组：Control组(溶剂组)、Dox组、YG1702组、联合给药组(YG+Dox)，其中Control组每2Day一次腹腔给药，Dox组每5Day一次腹腔给药(剂量：1.50mg/kg)，YG1702组每2Day一次腹腔给药(剂量：50mg/kg)，联合给药组在每2Day一次腹腔YG1702给药(剂量：25mg/kg)的基础上合并每5Day一次腹腔Dox给药(剂量：0.75mg/kg)。可见：同对照组比较，YG1702组与联合给药组移植瘤体积明显缩小(Control组肿瘤平均体积为883.90±209.80mm3，YG1702组肿瘤平均体积为387.10±72.90mm3，联合给药组肿瘤平均体积为442.30±120.40mm3，Control组vs.YG1702组，n＝6，P＝2.70×10-4，Control组vs.联合给药组，n＝6，P＝1.20×10-3)，Dox组肿瘤体积也有所减小(Dox组肿瘤平均体积为586.80±108.60mm3，Control组vs.Dox组，n＝6，P＝9.41×10-2)(图6，A，C)。同Control组比较，Dox组、YG1702组与联合给药组移植瘤重量明显缩小(Control组肿瘤平均重量为0.99±0.27g，Dox组肿瘤平均体积为0.64±0.13g，YG1702组肿瘤平均重量为0.28±0.04g，联合给药组肿瘤平均重量为0.39±0.08g，n＝6，P＝2.03×10-3)(图6,B)。上述结果表明，YG1702可有效地抑制尤文肉瘤细胞的致瘤性及移植瘤的生长速度，可能作为尤文肉瘤靶向治疗的候选小分子。
以上所述实施例仅是为充分说明本发明而所举的较佳的实施例，本发明的保护范围不限于此。本技术领域的技术人员在本发明基础上所作的等同替代或变换，均在本发明的保护范围之内。本发明的保护范围以权利要求书为准。